某些細(xì)胞必需干細(xì)胞血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。血清一般儲(chǔ)存于-20℃的溫度條件,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。 干細(xì)胞血清中絮狀沉淀的處理:
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。離心血清(400g,1-2分鐘)或簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾。
血清使用濃度一般為5-20%,常用是10%。過(guò)多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無(wú)限細(xì)胞系,迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
如何解凍血清才不會(huì)使其產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將干細(xì)胞血清從冷凍箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
混合型干細(xì)胞血清保存方法:
血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議將無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。